分子克隆和質(zhì)粒載體構(gòu)建

  分子克隆是指在分子水平上提供一種純化和擴(kuò)增特定DNA片段的方法。常含有目的基因，
用體外重組方法將它們插入克隆載體，形成重組克隆載體，通過轉(zhuǎn)化與轉(zhuǎn)導(dǎo)的方式，引入
適合的寄主體內(nèi)得到復(fù)制與擴(kuò)增，然后再?gòu)暮Y選的寄主細(xì)胞內(nèi)分離提純所需的克隆載體，
可以得到插入DNA的許多拷貝，從而獲得目的基因的擴(kuò)增。

  載體構(gòu)建是分子生物學(xué)研究中最常用的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。為把DNA分子運(yùn)送到受體細(xì)胞中去，
必須尋找一種能進(jìn)入細(xì)胞、在裝載了外來(lái)的DNA片段后仍能照樣復(fù)制的運(yùn)載體。理想的運(yùn)
載體是質(zhì)粒(plasmid)，在基因工程中，常用人工構(gòu)建的質(zhì)粒作為載體

本公司可以根據(jù)您的實(shí)驗(yàn)要求為您完成分子克隆和載體構(gòu)建及改造的任務(wù)。

一、載體構(gòu)建的基本實(shí)驗(yàn)步驟

(1)目的DNA片段和載體的制備；

(2)目的DNA片段和載體的連接；

(3)連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化；

(4)克隆篩選。

(5)測(cè)序驗(yàn)證及結(jié)果交付；

二、詳細(xì)內(nèi)容
1、以PCR擴(kuò)增為基礎(chǔ)的各類載體構(gòu)建，如大腸桿菌表達(dá)載體、酵母表達(dá)載體、桿狀病毒表達(dá)載體、哺乳動(dòng)物表達(dá)載體、報(bào)告基因載體、細(xì)菌表達(dá)載體 、穿梭質(zhì)粒等；
2、基因定點(diǎn)突變，包括單點(diǎn)突變，多點(diǎn)突變，基因缺失等；
3、載體元件替換和改造；
4、siRNA載體和miRNA表達(dá)載體構(gòu)建；
5、過表達(dá)載體構(gòu)建。