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Y2HGold酵母雙雜交菌株 貨號(hào):st082
基因型:
MATa,trp1-901,leu2-3,112,ura3-52,his3-200,gal4Δ,gal80Δ,LYS2::GAL1UAS–Gal1TATA–His3,GAL2UAS–Gal2TATA–Ade2URA3: :MEL1UAS–Mel1TATAAUR1-C MEL1

信息:
培養(yǎng)基:YPDA
菌株類別:酵母菌
培養(yǎng)條件:28℃,有氧,YPDA
質(zhì)粒轉(zhuǎn)化:電激
保存方式:30%甘油,-20℃
基本應(yīng)用:用于酵母雙雜交

菌株簡(jiǎn)介:
Y2HGold菌株是Clontech公司開發(fā)的GAL4系統(tǒng)酵母雙雜實(shí)驗(yàn)用菌株,MATa型,可直接轉(zhuǎn)化質(zhì)粒或與MATα型酵母菌株Y187通過mating操作進(jìn)行蛋白互作驗(yàn)證或篩庫試驗(yàn)。Transformation  marker為: trp1, leu2,報(bào)告基因?yàn)椋篈bAr, HIS3, ADE2, MEL1。Y2HGold -GAL4酵母雙雜系統(tǒng)需要兩種質(zhì)粒配套使用:PGBKT7和PGADT7。質(zhì)粒PGBKT7的篩選標(biāo)志為TRP1,用于表達(dá)DNA-BD(來自酵母轉(zhuǎn)錄因子GAL4N端1~ 174位氨基酸)與目標(biāo)蛋白(Bait)的融合蛋白;質(zhì)粒PGADT7的篩選標(biāo)志為L(zhǎng)EU,用于表達(dá)AD(GAL4 C端768 ~881 位氨基酸)與目標(biāo)蛋白(Prey)的融合蛋白。GAL4系統(tǒng)原理:一個(gè)完整的酵母轉(zhuǎn)錄因子GAL4可分為功能上相互獨(dú)立的兩個(gè)結(jié)構(gòu)域:位于N端1 ~ 174位氨基酸區(qū)段的DNA結(jié)合域(DNA-BD)和位于C端768 ~881 位氨基酸區(qū)段的轉(zhuǎn)錄激活域(AD)。DNA-BD能夠識(shí)別GAL4-responsive gene的上游激活序列UAS,并與之結(jié)合。而AD可以啟動(dòng)UAS下游的基因進(jìn)行轉(zhuǎn)錄。BD和AD單獨(dú)存在不能激活轉(zhuǎn)錄,但當(dāng)二者接近時(shí),則呈現(xiàn)完整的GAL4活性,使含有UAS的啟動(dòng)子下游基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)。正常條件下,BD不與AD結(jié)合,將要檢測(cè)的蛋白質(zhì)分別與BD和AD融合,形成 bait 融合蛋白(bait -BD)和 prey 融合蛋白(prey-AD),如果 bait 和 prey發(fā)生相互作用,就會(huì)促使 BD 和 AD 的相互接近,形成完整的GAL4,從而激活報(bào)告基因的轉(zhuǎn)錄。Y2HGold有四個(gè)報(bào)告基因:AbAr, HIS3, ADE2, MEL1,分別由三種不同的啟動(dòng)子(G1,G2,M1)啟動(dòng),這三種啟動(dòng)子只有GAL4識(shí)別的17bp核心區(qū)相同,其余部分均不同,大大降低了酵母雙雜假陽性發(fā)生的概率。此外新報(bào)告基因AbAr與以前的營(yíng)養(yǎng)缺陷報(bào)告基因相比具有更低背景的優(yōu)點(diǎn),也可以降低酵母雙雜假陽性發(fā)生的概率

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